gus染色原理,gus染色染不上的原因gus染色原理

1、β-D-葡糖醛酸酶（GUS基因编码）是从大肠杆菌K-12菌株分离出的一种酸性水解酶，能催化许多β-葡萄糖苷酯类物质的水解。2、其中很多水解产物具有发色团或形成荧光物质，采用某种β-葡萄糖苷酶作底物，其反应产物可用分光光度，荧光和组织化学的方法检测。3、其中组织化学法是催化的底物是X-gluc，产...

Gus 基因存在于某些细菌体内，编码β-葡萄糖苷酸酶（β-glucuronidase，GUS），该酶是一种水解酶，能催化许多β-葡萄糖苷酯类物质的水解。因为绝大多数植物细胞内不存在内源的GUS活性，因此gus基因广泛用作转基因植物的报告基因，尤其是在研究外源基因瞬时表达的转化实验中广泛应有。此外，gus基因3’端与其...

gus染色要洗脱是为了与实验组形成对照。洗脱的操作步骤及原理是：将材料转入无水乙醇或80%丙酮中脱色2-3次，至阴性对照材料为白色。GUS染色阳性的蓝色斑点很稳定，在酒精中不褪色。

丙酮会使蛋白质会发生性质上的改变而凝结起来．这种凝结是不可逆的，不能再使它们恢复成原来的蛋白质．蛋白质的这种变化叫做变性．也是用来固定蛋白质的一种固定液 各种染色方法对要显示对象是不同的，各种材料对固定剂的要求也不一样。

⑤ 表达量评估：确认对照是否正常染色，排除染色液问题。染色反应时间差异长时间染色变为蓝色可能暗示染液问题或菌污染，GUS基因来自菌体，注意处理。空载转化染色现象空载体上的GUS染色并非偶然，可能是由于载体上的35S启动子增强子影响了GUS表达，或材料被菌污染。使用植物内含子载体可降低此类干扰。

三、GUS染色步骤 1）取材：将根茎、叶片、花瓣等组织剪成小片，放到1.5ml离心管；【注意】：染色用植物材料的制备方法根据特定组织和器官类型而有差异。对于拟南芥的根/花/叶片，以及烟草幼苗的根，可以不做任何预处理直接进行染色；但是，对于烟草和马铃薯的茎和叶片需要先剪切成薄片（~1-3mm）再进行...

(2)吸干0．5％Triton一100溶液，每孔加 ．人50—60微升X—Glue染色液(O．005％ X—Glue。40％pH=7的0．2摩尔磷酸缓冲 液，2O％ 甲醇)，37℃ 下温浴6一l0小时或过 夜。(3)吸干染色液，用酒精脱色后观察叶片 的染色情况，边缘染为蓝色的记为阳性 (GUS )，未染色的记为阴性(GUS一)。

主要设备 显微镜(BX50 OLYPUS)，研钵，高速离心机，Nano drop核酸蛋白测定仪 实验材料 转基因拟南芥 实验步骤 1. 转基因植物的GUS组织化学染色分析 取9.7mL上述缓冲液(除X-Gluc外)，加0.3mL X-Gluc母液即可；2. 转基因植物的GUS活性测定 取不同株系转基因拟南芥组织约0.lg，用石英砂研磨；加入1mL...

4、浸泡过的组织块放于共培养基上培养。5、组织块转移到筛选培养基上培养，选出阳性幼苗。检测方法根据实验目的不同而不同。可以用PCR扩增目的片段；如果有报告基因GUS、GFP等也可以进行染色或荧光观察。原理：选择一种特制的空质粒载体（如PBI121质粒载体），其上要求含有T-DNA边界序列（此处可参见词条...