rh2

研究历史

从19 世纪初，德国、前苏联，日本、韩国和中国的学者先后进行了对人参的现代研究。[1]

1854年，德国科学家在西洋参中首次分离出人参皂苷成分。

1916年，日本科学家酒井和太郎报导人参对神经系统的作用，验证了人参的药用功效。

1963年，日本柴田承二教授发现人参皂苷是人参的主要活性成分，并且分离提取到人参皂苷单体，使人参的内在质量得以控制，而后进行一系列化学与药理学研究，使得人参研究有所突破。

1983年，日本学者北川勋[2]从红参中分离得到人参皂苷Rh2，收率仅为0.001%，而今人参皂苷Rh2已经实现公斤级的生产。

1985年，小田岛肃夫等[3]对Rh2进行体外细胞培养试验发现Rh2对小鼠的肺癌细胞，大鼠的肝癌细胞、小时的B16黑色素瘤细胞的增殖具有较明显的特异性抑制作用。

1992年宋长春等[4]用西洋参茎叶总皂苷10g溶于20% 氢氧化钠溶液中，经乙酸乙酯萃取，得粗品3.2g，再经低压硅胶色谱法，以MeOH-H20重结晶，得人参皂苷Rh2 142mg(收率1.86 % )。

1993年马文彬等[5]首次用 Rh2进行动物的体内试验。结果表明人参皂苷Rh2具有较强的抗癌活性，短期给药即可阻断S期细胞向G期移行，造成S期肿瘤细胞堆积,从而抑制 S180肉瘤细胞的增殖。

2000年10月，金永日等[6]人将人参皂苷Rb1、Rb2、Rb3、Rc、Rd、Re、Rf等皂苷的单体，在常压下进行碱水解，操作简单安全，能够直接得到20(S)型人参皂苷Rh2。首次实现了人参皂苷Rh2工业化生产，满足医学临床应用。

2006年第一个人参皂苷Rh2单体产品（今幸胶囊）上市销售。

2018年王宇石等[7]对人参皂苷Rh2相互作用蛋白质的研究，揭示人参皂苷Rh2的细胞内靶点，并最终阐述Rh2抗肿瘤作用的分子机制；向明等[8]揭示了人参皂苷Rh2的免疫调节机理。

原人参二醇

药理实验证实， PPD 有抑制多种癌症生长、抗抑郁、激活氯离子通道、抑制被激活的钠通道去极化、抑制人胚肾HEK-293细胞生长和幽门螺旋杆菌生长等诸多活性。可用于增强抗癌药物疗效，降低抗癌药物毒性、预防和治疗化疗引起的白细胞降低及增强机体免疫功能的辅助治疗药物[9]。

人参皂苷Rh2与PPD在分子结构上相差一个糖基，在所有二醇组人参皂苷中，人参皂苷Rh2最接近PPD。在人体中几乎所有的二醇组皂苷在肠道中会被代谢为C-K、人参皂苷Rh2和PPD，C-K和人参皂苷Rh2进入血液会进一步转化为aPPD，再进一步发挥作用。所以有一个推论，吃PPD吃等同于二醇组人参皂苷,PPD可以看成是人参皂苷的吸收代谢后药物。[10]

制备方法酸水解法

用酸水解法水解二醇型皂苷制备人参皂苷Rh2 时，首先C20 位的糖基脱掉然后发生C20 位的构型变化，生成2种异构体的混合物，以R 构型为主。

张兰兰等[11]在2009 年申请了一项人参皂苷Rh2 提取物专利，其制备方法：步骤1，将含有人参皂苷类成分的药材用水提取，提取液通过大孔吸附树脂柱，用乙醇洗脱，收集洗脱液，浓缩至干，得总皂苷；步骤2，将步骤1 得到的总皂苷溶于酸溶液中反应，反应完成后调节pH 至中性，收集沉淀物；步骤3，将沉淀物进行反相硅胶柱层析，用乙腈-水混合液进行洗脱，收集富含人参皂苷Rh2 的流份，浓缩即得。

碱水解法

用碱水解法制备人参皂苷Rh2 时，首先C20 位的糖基脱掉，C20 位的不发生构型变化。碱水解法可用于制备20(S)-Rh2。将西洋参茎叶皂苷溶于聚乙二醇溶液中，加入20%NaOH，125℃加热回流37 h，得主要产物为20(S)-Rh2 和PPD。

将20(S)-原人参二醇型皂苷8.0 g，溶于30 mL 水中，加入饱和的NaOH 水溶液20 mL，沸水浴回流6h，冷却后移入分液漏斗中，加正丁醇萃取4 次，浓缩正丁醇层，计算20(S)-Rh2 转化率为9.64%[12]。

金永日等[6]在2000年申请了利用碱水解的方法制备人参皂苷Rh2的专利：一种稀有人参皂甙的制备方法，将人参皂苷Rb1、Rb2、Rb3、Rc、Rd、Re、Rf等皂苷的单体，在常压下进行碱水解，直接得到20-(S)-人参皂苷Rh2。

微生物转化法

利用微生物转化法来制备人参皂苷Rh2，一般先将人参二醇皂苷组转化成人参皂苷F2 或者人参皂苷Rg3，进而转化生成人参皂苷Rh2。从长白山人参土壤中筛选出的疣孢漆斑菌（Myrothecium verrucaria）能将人参皂苷Rg3转化为人参皂苷Rh2及二醇型皂苷元aPPD[13]。

吕国忠等[14]在2011年申请了双胞柱孢菌及利用其制备人参皂苷Rh2的专利：一种人参致病真菌双胞柱孢菌（Cylindrocarpon didymium），该菌具有转化人参皂苷Rb1、Rd 为人参皂苷Rh2 的能力。

酶转化法

利用酶选择性作用于人参皂苷的特定糖苷键，从而定向制备人参皂苷Rh2。从鲜人参根中提取出人参皂苷α-阿拉伯糖苷酶能转化人参皂苷Rg3 成为人参皂苷Rh2，其反应条件：底物浓度10 mg·mL-1、pH5.0、55℃反应24 h，转化率可达60%[15]。

宋兆辉等[16]在2009年申请了一项人参皂苷Rh2 提取物及制备方法专利：用水提取含有人参皂苷类成分的药材，提取液醇沉，收集上清液，浓缩至干，得总皂苷；将总皂苷溶于pH5 左右的缓冲液，加β-葡萄糖苷酶反应，收集沉淀物；将沉淀物用乙醇溶解，进行硅胶柱层析，收集富含人参皂苷Rh2 的流份，浓缩即得。

化学合成法

人参皂苷Rh2还可通过化学方法合成。惠永正等[17]在2005年申请了一项人参皂苷Rh2的合成专利：首先选择性保护原人参二醇，得到单取代的原人参二醇，再由葡萄糖基供体和单取代的原人参二醇在路易斯酸的催化作用下进行糖苷化反应，然后脱去保护基，经分离纯化得20(S)-Rh2。

药用功效抗肿瘤作用

人参皂苷Rh2的抗肿瘤活性一直是近三十年来学者们研究的重点，其作用机制多样而复杂，有直接抑制亦有多途径协同作用，对乳腺癌、卵巢癌、宫颈癌、肺癌、肝癌、前列腺癌、白血病、神经细胞和脑胶质瘤、黑色素瘤等多种肿瘤细胞，在抑制其细胞增殖，诱导分化及凋亡，均表现出明显的抗肿瘤活性，它有望可成为临床上广谱抗肿瘤治疗药物。[18]

将人参皂苷Rh2用于86位癌症患者。分别患有16种不同癌症的患者进行临床试验，这些癌症种类有肺癌、胃癌、胃肠癌、食道癌、膀胱癌、子宫颈癌、肾癌、脑癌、变性淋巴癌及黑色素瘤。结果:95%以上的患者痛苦减轻或消除，生活质量提高；90%以上患者局部肿瘤被控制、缩小或消除；癌症治疗有效率高达80%以上。[19]

逆转耐药性

人参皂苷Rh2对肺腺癌A549细胞、顺铂耐药细胞A549 DDP的抑制率。发现人参皂苷Rh2对这两种细胞均有明显抑制作用，且随着浓度的增加，人参皂苷Rh2对A549 DDP细胞的抑制率明显增强。表明人参皂苷Rh2能促使A549 DDP细胞凋亡。[20]

减轻放化疗药物毒副作用

人参皂苷Rh2对CY100mg/kg 所致的小鼠外周血液中白细胞减少有显著的升高作用。提示人参皂苷Rh2 可以拮抗化学治癌药物毒副作用。[22]在放疗期间，随着放疗次数的增加，骨营养的流失，患者会出现不同程度的骨质疏松的症状。Rh2能够诱导成骨细胞MC3T3-E1分化和矿化成抗骨质疏松剂生物活性的一部分，通过增加骨密度抑制骨质疏松症的发生。

人参皂苷Rh2或辅酶Q10单独使用时对环磷酰胺(CTX)所致的骨髓抑制有一定保护作用，能提高骨髓有核细胞计数和骨髓增生级别，联合使用时对骨髓的保护作用更明显，其机制可能是Rh2或辅酶Q10促进了骨髓祖细胞增殖。

修复脑损伤

给予人参皂苷Rh2之后，海马区细胞排列要相对整齐、有序。人参皂苷Rh2是有助于脑缺血再灌注后大脑神经功能及记忆的恢复。表明人参皂苷Rh2能上调在脑缺血再灌注损伤大鼠海马神经元的MeCP2表达, 并改善学习记忆能力。

提高机体耐缺氧能力和适应性

人参皂苷Rh2具有明显的抗缺氧作用，具体表现为人参皂苷Rh2可剂量依赖性延长大鼠的耐缺氧时间；降低缺氧大鼠的心率，改善其心功能；降低缺氧大鼠的血液中AST，ALT和LDH的含量，保护缺氧大鼠的心脏，等脏器；升高缺氧大鼠红细胞数和血红蛋白含量，提高大鼠的耐缺氧能力。[23]

心血管系统的作用

对心肌的保护作用

人参皂苷Rh2 可增加高脂膳食大鼠心肌缺血再灌注后外周血内皮祖细胞数量，从而减轻心肌缺血。人参皂苷Rh2 可促进血管细胞修复及保护受损心肌的作用。[24]

抗动脉粥样硬化作用

人参皂苷Rh2可以通过降低大鼠血清IL-6水平和抑制主动脉TIMP-l、VEGF的表达，从而起到抗动脉粥样硬化的作用。

保护和刺激骨髓造血功能

人参皂苷Rh2可以促进小鼠外周血干细胞移植后血细胞数目恢复、促进骨髓单个核细胞数目恢复、造血干细胞集落形成，从而促进小鼠移植后造血重建。说明人参皂苷Rh2对骨髓造血功能有保护和刺激作用。在放化疗期间，常常会因为白细胞、红细胞数量急剧下降而终止治疗，人参皂苷Rh2作为骨髓造血功能的保护剂，能够有效的解决这方面的问题。

保护肝脏

人参皂苷Rh2阻断LPS刺激RAW 264.7细胞中CD14和TLR4表达，抑制TAK1和JNK磷酸化以及NF-KB p65的核转移，并阻断IκB-α降解。人参皂苷Rh2在LPS刺激4小时内持续抑制HIF-1α表达，提示人参皂苷Rh2对肝损伤具有显著的肝保护作用。[30]

对血糖的影响

人参皂苷Rh2除能明显改善实验性糖尿病大鼠的一般状态，减轻多饮、多食、多尿、消瘦等症状，对糖尿病大鼠烂尾、烂指/趾、感染、白内障等并发症亦具有一定的防治作用。人参皂苷Rh2可使空腹血糖、TC、TG、LDL 明显降低，使HDL明显升高，显示人参皂苷Rh2具有良好的降低血糖、血脂，纠正糖脂代谢紊乱作用。

抗疲劳作用

人参皂苷Rh2具有缓解体力疲劳作用，且有剂量的依从性。研究表明，人参皂苷Rh2能明显延长动物负重游泳时间，增加肝糖原的储存量，降低运动时血清尿素水平和控制运动后血乳酸升高。[25]

增强免疫力

人参皂苷Rh2能够通过多种途径调节和增强机体免疫功能，对免疫系统具有保护作用。人参皂苷Rh2可显著提高IL-2（白介素-2）活性，提高巨噬细胞的吞噬功能和NK细胞（自然杀伤细胞）的杀伤活性。[33]人参皂苷Rh2还可作为免疫调节因子，还可促进白蛋白、γ球蛋白的合成，提高T细胞和巨噬细胞的功能，同时还能抑制正常淋巴细胞染色体突变，稳定免疫系统。

安全性研究

人参皂苷Rh2不仅具有广泛的药理活性，还具有良好的安全性，吉林人参研究所高峰等人通过实验证实，人参皂苷Rh2对动物的神经系统、呼吸系统、心血管系统无明显影响。

哈尔滨医科大学、浙江省疾病预防控制中心、国家兴奋剂及运动营养测试研究中心等权威机构对人参皂苷Rh2进行了相应的毒理试验、稳定性试验以及相关国家标准试验，结果表明人参皂苷Rh2无毒副作用，可以长期服用。

毒理学试验

试验单位：吉林人参研究所

观察测定指标：

①体重变化结果：在给药后1－8周内，各剂量组的大鼠体重增加较大，在12周后，增重减缓。P>0.05，无显著性差异。

②血清生化学检查：给药期各剂量组生化指标均在正常值范围内，恢复期未见有异常变化。

③血液学检查：给药期及恢复期各剂量组的各项指标均在正常值范围内，与对照组比较无显著性差别。

④主要脏器检查：剖取心、肝、脾、肺、肾五个脏器，检查表面失去光泽、弹性减弱、切面含血、切面出血、水种、坏死、异常液体流出等八项，结果未见异常。

⑤病理组织学检查：显微镜下发现大鼠对照组中与中剂量组均含2例肺内炎症，低剂量组与高剂量给药组均无异常。经分析对照组与实验组相比较，没有实验意义。狗的对照组、高剂量组、低剂量组无异常所见。

结论：人参皂苷Rh2连续口服24周，恢复观察两周，各组大鼠、狗的一般状态，体重增长，血清生化学检查，血液学检查，主要脏器大体检查、病理学切片检查，未见明显改变，可以证明，人参皂苷Rh2制剂安全无毒。

原料中兴奋剂的检测

检测单位：国家兴奋剂及运动营养测试研究中心

检测结果：经检测该样品，未发现国际奥委会 2004年规定禁用的刺激剂、麻醉剂、β-阻断剂、利尿剂和激素类药物。

原料中的重金属及农药残留检测

2017年，浙江公正检验中心有限公司检测报告，人参皂苷Rh2保健品今幸胶囊中重金属砷、铅、汞无残留，六六六、滴滴涕等农药未检出。